解讀反相液相色譜的左膀右臂

在液相色譜方法開(kāi)發(fā)時(shí)選擇合適的有機(jī)溶劑需要考慮幾大關(guān)鍵因素(見(jiàn)最后的表格)。其中，黏度是重要因素之一，因?yàn)楦唣ざ热軇?huì)產(chǎn)生高背壓，因而可能會(huì)對(duì)儀器系統(tǒng)帶來(lái)限制。

其它重要的溶劑特征還包括UV截止波長(zhǎng)和極性指數(shù)：UV截止波長(zhǎng)較高會(huì)導(dǎo)致UV/Vis檢測(cè)的靈敏度不佳，而溶劑的極性指數(shù)較低則往往會(huì)導(dǎo)致化合物洗脫較快，因而通常用于色譜柱的清洗。

優(yōu)選溶劑：

乙腈、甲醇、丙酮

乙腈 毫無(wú)疑問(wèn)是優(yōu)選的有機(jī)溶劑，因?yàn)槠湓谂c水的混合體系中產(chǎn)生的系統(tǒng)背壓極低，而且UV截止波長(zhǎng)也很低，因此UV/Vis檢測(cè)的靈敏度更高。

甲醇 是另一種常用的有機(jī)溶劑，它的洗脫強(qiáng)度與乙腈相當(dāng)，UV吸收相對(duì)其他溶劑也較低，而且價(jià)格比乙腈便宜得多。甲醇的主要缺點(diǎn)是粘度較大帶來(lái)的高背壓，尤其是在使用小粒徑的HPLC色譜柱時(shí)更為明顯。

雖然丙酮 的UV吸收較高，但如果分析物在較高的UV波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，或者使用其它類(lèi)型檢測(cè)器，如質(zhì)譜或ELSD，則丙酮也可以進(jìn)行有效的使用。

次選溶劑：

乙醇、異丙醇/正丙醇、四氫呋喃

一般不建議使用乙醇，因?yàn)槠湓谂c水的混合體系中產(chǎn)生很高的背壓。但是有時(shí)乙醇對(duì)于針對(duì)成品的制備方法來(lái)說(shuō)是優(yōu)先選擇，因?yàn)樗梢员苊馊軇埩簟?/span>

異丙醇和正丙醇 的洗脫強(qiáng)度較高，也是色譜柱進(jìn)行低流速清洗最常用的溶劑，但是它們同樣會(huì)產(chǎn)生較高的背壓。另外，它們是很好的助溶劑，在分析完整蛋白時(shí)經(jīng)常被使用。

四氫呋喃 的洗脫強(qiáng)度與正丙醇相當(dāng)，但由于較昂貴所以不太常用。但是，它可以作為脂肪或高色素樣品的清洗或再生溶劑。

[來(lái)源：飛諾美]